鉤椎關(guān)節(jié)作為頸椎特有解剖結(jié)構(gòu)，對維持人體頸椎正常生理活動起重要作用，其結(jié)構(gòu)受損可造成各類頸部疾病。鉤椎關(guān)節(jié)位于 C2-C6椎體后外側(cè)，由后部兩側(cè)的小唇狀椎體鉤和相應(yīng)的椎體下斜坡構(gòu)成［1-2］。鉤椎關(guān)節(jié)特殊的解剖位置使其在頸椎的運(yùn)動及疾病中扮演著重要角色。在頸椎活動范圍內(nèi)，其外側(cè)關(guān)節(jié)的相關(guān)運(yùn)動是頸椎獨(dú)特的活動特征［3-4］。鉤椎關(guān)節(jié)的主要作用在于維持頸椎運(yùn)動單元的穩(wěn)定性和活動性，承受應(yīng)力負(fù)荷，防止椎間盤向外側(cè)或后外側(cè)突出［5-6］; 其壓縮作用表現(xiàn)為在椎間孔處壓迫神經(jīng)根，以及鉤椎關(guān)節(jié)的骨贅側(cè)唇壓迫椎動脈［7］。故鉤椎關(guān)節(jié)受損所帶來的一系列不良影響在臨床上具有重要研究價(jià)值。
經(jīng)檢索文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，以往對鉤椎關(guān)節(jié)的研究多為探討其解剖結(jié)構(gòu)，從而得到應(yīng)用于臨床方面的結(jié)論。例如:仝苗苗［8］利用影像學(xué)技術(shù)測量頸椎鉤椎關(guān)節(jié)的主要組成結(jié)構(gòu)及其相鄰骨性結(jié)構(gòu)的形態(tài)學(xué)參數(shù)，分析青少年頸椎組成結(jié)構(gòu)的生長變化特點(diǎn); 王曉剛等［9］利用超聲檢查方法與圖像特征對頸椎重要骨性標(biāo)志及毗鄰結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究，提供了具有實(shí)用價(jià)值的超聲引導(dǎo)下頸部結(jié)構(gòu)影像資料; 王星等［2］對 3 歲兒童尸體標(biāo)本頸椎進(jìn)行連續(xù)切片并用蘇木精—伊紅染色，觀察學(xué)齡前期兒童鉤椎關(guān)節(jié)組織的發(fā)育特點(diǎn)，得出學(xué)齡前期兒童的頸椎尚未形成鉤椎關(guān)節(jié)的結(jié)論。但是目前極少有學(xué)者對鉤椎關(guān)節(jié)進(jìn)行組織結(jié)構(gòu)的細(xì)致研究，因此無法確定鉤椎關(guān)節(jié)內(nèi)部組織成分，無法分析其在生長發(fā)育過程中組織形態(tài)方面的變化，本研究即針對這一問題展開了觀察與分析。
目前采用蘇木精—伊紅染色結(jié)合甲苯胺藍(lán)染色、番紅—固綠染色及阿爾新藍(lán)過碘酸雪夫等染色法可以全面客觀地觀察到目標(biāo)結(jié)構(gòu)的組織形態(tài)特征［10］。故本研究利用蘇木精—伊紅染色和甲苯胺藍(lán)染色對成人鉤椎關(guān)節(jié)進(jìn)行觀察，并對鉤椎關(guān)節(jié)的解剖結(jié)構(gòu)進(jìn)行探討。
1.1 研究對象與主要試劑、儀器
選取 1 例成年男性全頸椎標(biāo)本，截取 C2～ C6 鉤椎關(guān)節(jié)進(jìn)行脫水固定包埋。蘇木精—伊紅試劑盒，甲苯 胺藍(lán)試劑盒，光固化機(jī)，德國 EXAKT300CP 硬組織切片機(jī)，德國EXAKT400S 磨片機(jī)，福爾馬林液，梯度乙醇( 70% ～ 95% ) ，無水乙醇，Technovit 7200 樹脂液，320 目、800 目、1200目、4000 目砂紙。
1.2 方法
標(biāo)本經(jīng)福爾馬林液固定 48 h 后流水沖洗 24 h，行梯度乙醇( 70% ～ 95% ) 上行脫水( 每步 24 h) ，入無水乙醇+ Technovit 7200 樹脂液( 配制比 3 ∶ 7) 浸液浸泡2 d，入無水乙醇 + Technovit 7200 樹脂液( 配制比1∶ 1)浸液浸泡 2 d，入 Technovit 7200 樹脂液浸泡 7 d 后，再入Technovit 7200 樹脂液浸泡3 d，于光固化機(jī)中包埋聚合。將標(biāo)本組織塊取出，使用德國 EXAKT300CP 硬組織切片機(jī)對組織塊進(jìn)行不脫鈣聯(lián)合切片，切片厚度為200 μm，以德國 EXAKT400S 磨片機(jī)依次使用320 目、800 目、1 200 目砂紙將切片磨至厚度為25 μm，最后以4 000 目砂紙對打磨好的切片進(jìn)行拋光。
蘇木精—伊紅染色: 骨組織切片經(jīng)梯度乙醇復(fù)水， 浸入蘇木精染色 3 ～ 8 min，流水沖洗，浸入 1% 鹽酸酒精 30 s 進(jìn)行分化，水洗，蒸餾水過洗，0． 6% 氨水反藍(lán)，流水沖洗，切片入伊紅染液中染色 1 ～ 3 min，蒸餾水稍洗，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，將切片從二甲苯中取 出稍晾干，中性樹膠封片。
甲苯胺藍(lán)染色: 骨組織切片經(jīng)梯度乙醇復(fù)水，甲苯胺藍(lán)染色約 30 min，自來水沖洗，冰醋酸分化至細(xì)胞核清晰，自來水沖洗，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。
1.3 觀察指標(biāo)
觀察鉤椎關(guān)節(jié)中椎體、椎間盤、骨髓核、骨小梁、骨組織及骨髓組織的形態(tài)及結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。
2.1 蘇木精—伊紅染色結(jié)果
蘇木精—伊紅染色的鉤椎關(guān)節(jié)側(cè)縱切面上可見上下椎體及中間的椎間盤。周圍結(jié)締組織與椎體相通處可見不著色的鈣鹽沉積，中間可見骨髓核( 軟骨樣基質(zhì)) ，上下椎體切面可見粉染骨小梁，骨小梁之間可見紫色骨髓組織( 圖 1) 。
2.2 甲苯胺藍(lán)染色結(jié)果
甲苯胺藍(lán)染色的鉤椎關(guān)節(jié)中可以觀察到成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的各種骨組織形態(tài)。切片中可見椎體切面藍(lán)染骨小梁，骨小梁體積、寬度及分布均正常( 圖 1) 。
鉤椎關(guān)節(jié)是成人頸椎的結(jié)構(gòu)，具有獨(dú)特性，其類似于“雙蓮橋關(guān)節(jié)，最早由德國解剖學(xué)家 Luschka 在對成人頸椎的局部解剖過程中發(fā)現(xiàn)［11］。鉤椎關(guān)節(jié)作為頸椎特有的結(jié)構(gòu)，對頭顱及寰樞椎生長發(fā)育、生物力學(xué)穩(wěn)定、三維支撐與多向運(yùn)動、頸髓保護(hù)和脊柱多維運(yùn)動起著至關(guān)重要的限制和保護(hù)作用［12］。詳細(xì)觀察鉤椎關(guān)節(jié)形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)有助于了解生長發(fā)育過程中鉤椎關(guān)節(jié)基本組織變化及內(nèi)部組織形成情況。
為研究鉤椎關(guān)節(jié)組織形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)，本實(shí)驗(yàn)將蘇木精—伊紅染色和甲苯胺藍(lán)染色作為基本染色法，結(jié)合 硬組織切片技術(shù)對鉤椎關(guān)節(jié)形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行探討。硬 組織切片技術(shù)能夠完整地保留骨組織原本的結(jié)構(gòu)及成 分，因此已成為目前最常用的觀察骨組織的方式。其對于不脫鈣的骨組織切片具有極佳的適配性，對研究骨組織成分以及骨形成有重要作用［13］，對于了解生長發(fā)育及組織構(gòu)成具有極大意義。既往文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，蘇木精—伊紅染色可避免因?yàn)殁}的存在而受影響的骨組織切片［14-16］。蘇木精—伊紅染色作為標(biāo)準(zhǔn)的染色方法， 可將胞質(zhì)內(nèi)的核糖體及細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)染成紫藍(lán)色，將細(xì)胞質(zhì)染成紅色［17-18］，該染色法通過陰陽離子互相結(jié)合，可起到加強(qiáng)固定效果［19］。在識別各種潛在的惡性病變中，甲苯胺藍(lán)是一種實(shí)用且有效的輔助診斷工具［20-21］，其吩噻嗪類堿性染料的特征可將細(xì)胞核染成藍(lán)色［22-23］。本研究在對鉤椎關(guān)節(jié)的觀察中采用蘇木精—伊紅染色和甲苯胺藍(lán)染色，在保留骨組織結(jié)構(gòu)的情況下簡化了實(shí)驗(yàn)步驟，又避免了脫鈣失敗對鉤椎關(guān)節(jié)切片和染色的影響，兩種染色方法相結(jié)合，可見鉤椎關(guān)節(jié)骨小梁體積、寬度及分布均勻正常，骨髓組織分布于骨小梁之間，鈣鹽沉積在周圍結(jié)締組織與椎體相通處，上下椎體和椎間盤間隔鮮明。
在人體解剖結(jié)構(gòu)中，鉤椎關(guān)節(jié)及其毗鄰結(jié)構(gòu)對頸椎疾病的發(fā)生有著重要影響。Clausen 等［24］對鉤椎關(guān)節(jié)生物力學(xué)進(jìn)行了有限元分析發(fā)現(xiàn)，鉤椎關(guān)節(jié)的形成對下頸椎耦合運(yùn)動起著重要作用，其可增加頸椎的活動度，而鉤椎關(guān)節(jié)中鉤突的形成卻對頸椎活動有著限制力學(xué)載荷的影響。鉤突的病變或增生可壓迫和刺激周圍的血管與神經(jīng)，從而產(chǎn)生不同類型頸椎病的相關(guān)癥狀［25-26］; 鉤突也是骨關(guān)節(jié)炎發(fā)生的常見部位，關(guān)節(jié)表面因摩擦受損形成點(diǎn)蝕和磨痕，鉤突變形成為骨贅刺，從而導(dǎo)致椎間孔狹窄［27-28］。鉤突骨贅也可引起頸椎刺激或頸椎節(jié)段性不穩(wěn)定［29-30］，骨贅的形成會壓迫椎動脈及交感神經(jīng)，對頸椎型心絞痛的發(fā)病機(jī)制產(chǎn)生一定的影響［31］。
鉤椎關(guān)節(jié)作為最早退變的關(guān)節(jié)之一，不僅會導(dǎo)致成人疾病，在兒童生長發(fā)育過程中也起著重要作用。
隨著現(xiàn)代影像技術(shù)和相關(guān)研究手段的不斷深入，普遍 認(rèn)為鉤椎關(guān)節(jié)是根據(jù)頸椎發(fā)育的生物力學(xué)及隨著年齡 的增長、負(fù)重增加，頸椎鉤突區(qū)域發(fā)生變化而形成的， 即為反應(yīng)性骨形成和退行性變的結(jié)果［32-33］。而兒童 頸椎活動度有限，且頸椎負(fù)重較小，所以在兒童時(shí)期未 形成鉤椎關(guān)節(jié)［2］。故對鉤椎關(guān)節(jié)的形成及影響等臨 床研究還有待深入。
綜上，硬組織切片技術(shù)可以較完整地保留鉤椎關(guān)節(jié)的固有組織形態(tài)，通過蘇木精—伊紅染色及甲苯胺藍(lán)染 色可清晰地觀察成人鉤椎關(guān)節(jié)的組織形態(tài)及各層結(jié)構(gòu)。
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